本文利用基因工程的手段,构建含有类胡萝卜素合成基因的工程菌株,筛选出R_(54)和R_(+6)菌株进行产类胡萝卜素的研究。
结果发现: (1)最佳发酵条件是:1%浓度的糖蜜培养基,首先37℃恒温振荡9小时,加入诱导剂IPTG后转入23℃继续培养至48小时。
(2)类胡萝卜素的最佳抽提方法为:收集的菌体用6ml 3mol/L的盐酸在室温下浸泡并振荡60分钟,取出后沸水浴加热4分钟,迅速冷却后离心,然后用丙酮浸提。
(3)应用薄板层析进行色素分离的最适层层剂为:V甲醇:V丙酮:V石油醚=2:5:3,在此条件下至少可分离出五种成分。
(4)工程菌在1L和3L发酵罐中小试,其细胞生物量达到2.5mg/ml,色素产量达到0.55μg/ml。
【关键词】:类胡萝卜素 重组菌 抽提色素 正交试验 发酵条件 薄层层析 发酵罐
【学位授予单位】:浙江大学
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