重组盐生杜氏藻双功能域3-磷酸甘油脱氢酶的表达纯化和部分酶学性质研究

盐生杜氏藻Dunaliella salina(简称盐藻)是一种抗盐能力很强的单细胞绿藻，具有极强的渗透调节能力。甘油是它的主要渗透调节物质。杜氏藻细胞内有一条专门的调节渗透压的代谢途径，即甘油循环代谢途径，它能对外界盐浓度变化作出迅速反应，调节胞内甘油浓度以使细胞内外达到渗透平衡。3-磷酸甘油(G-3-P)脱氢酶是甘油循环中的第一个酶，在其中起重要的调节作用。

因此研究杜氏藻G-3-P脱氢酶的性质具有重要意义。 实验室在前期工作中已获得盐藻Osm-GPD的全长基因，生物信息学分析表明该基因结构相对于其它物种的GPD基因而言非常特殊，即同时具有两个功能结构域：GPD Domain和SGPP Domain。本研究在对具有双功能域的重组盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶的表达条件优化和纯化的基础上，对其性质进行了初步研究。

1、表达条件的优化 通过降低诱导温度和改变诱导剂浓度浓度的方法，在30℃，0.3mmol／L IPTG的条件下，诱导工程菌株BL21(DE3)／pET32-GPD1.9，目的蛋白质重组盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶以可溶蛋白的形式存在于上清中。

2、重组盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶的纯化 将酶粗提液经Chelating F.F.金属螯合层析，透析，肠激酶酶切，Chelating H.P.金属螯合层析等步骤，分离纯化了重组3-磷酸甘油脱氢酶，SDS-PAGE结果都显示出一条带，GPD(逆向)比活性为192U／mg，GPP比活性为4440U／mg；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得相对分子质量为60KDa。

【关键词】：盐生杜氏藻 重组3-磷酸甘油脱氢酶 GPD功能域 GPP功能域 纯化 酶学性质