盐藻hsp70a cDNA片段的克隆与分析

建立一个有效的转基因盐藻系统,需要将目的基因控制在适当的时间、适当的条件、甚至适当的水平进行表达。因此选择理想的启动子是至关重要的。目前最常用的调控基因表达的方法是使用组织特异性启动子,但此方法在表达的可控性上稍差。

根据衣藻、矮牵牛花、Pisumsativum等真核生物hsp70a氨基酸高度保守序列设计两对简并引物,以热休克盐藻cDNA为模板进行巢式PCR扩增,产物经T A克隆转化至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析,获得了盐藻热休克蛋白70acDNA片段。

在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为372bp,编码126个氨基酸。推导的氨基酸序列与与下列物种的hsp70a比较:衣藻为96%,矮牵牛花为94%,Pisumsativum为86%,番茄为86%,人为85%,果蝇和酵母分别为84%和83%。所克隆的序列为盐藻hsp70acDNA片段。

【关键词】： 杜氏盐藻 hspa cDNA 简并引物

【基金】：国家自然科学基金(30270031)