应用PCR技术扩增Nos基因、CaMV35S启动子片段和氯霉素抗性基因Cat,并与胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3连接,构建真核表达载体pMDCKN-Cat。DNA序列分析结果表明:表达载体中的胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因、启动子CaMV35S、终止子Nos和氯霉素抗性基因Cat与己知序列完全一致。
采用LiAc/PEG介导法将质粒pMDCKN-Cat转化至盐藻细胞中,通过氯霉素抗性基因筛选和PCR鉴定获得转基因盐藻细胞。经Westernblotting检测,在硝酸纤维素膜上出现清晰的条带,分子量为20.1KD,证明胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因在盐藻中得到成功表达。
【作者单位】:大连海洋大学海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室
【关键词】:胰蛋白酶抑制剂KsTl基因 盐藻 LiAc/PEG介导法 真核表达载体
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原文链接:http://www.yanzao360.com/2112.html
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