本论文选用中国海洋大学微藻种质库保存的7株盐藻为研究材料,对其进行了盐度、温度以及光照等生态因子的适应性评价,结合传统细胞学形态分类和分子生物学手段进行了分类地位和亲缘关系的探讨,为进一步研究和开发这一藻类资源提供依据。本研究还初步研究了盐藻的耐盐蛋白,并应用流式细胞术这一新技术进行了盐藻耐盐机理研究方法的初步尝试。
研究结果如下: 1.在本实验条件下,这7株盐藻对温度和光照强度的适应性相似,最佳生长条件分别为25℃,6000lx。盐度适应实验结果表明7株盐藻均为耐盐品系,但其耐盐性存在显著差异,相对最适盐度为50～150不等,其中以A57对高盐度的耐受性最强。在优化的盐度、温度及光照条件下,A85增殖能力较强,具有一定的开发潜力。
2. PCR扩增7株盐藻的5.8S rDNA和ITS序列,并完成序列测定,将从Genbank搜索的7条已定种盐藻的相应序列与7条扩增序列同时进行分析,构建进化树,得出7株盐藻均与绿色杜氏藻(D.viridis)亲缘关系最为密切,结合细胞形态学及生理生化分析的鉴定结果,可以确定这7株盐藻均为绿色杜氏藻的不同株系,其中A85、A57和A83亲缘关系最近,A121和A124关系最为密切。筛选的12个随机引物进行7株盐藻RAPD分析的结果与采用5.8S rDNA和ITS序列分析的结果基本一致。
3.测定高盐胁迫下盐藻A57的胞内甘油含量并提取总蛋白进行SDS-PAGE分析,发现其细胞胞内甘油含量的调整在高盐胁迫6h内即可完成,但蛋白合成在胁迫初期受到显著抑制,胁迫持续至3周,一些功能蛋白的表达被明显诱导,表达强度是对照3倍以上或接近3倍的蛋白有75KD、70KD、15KD蛋白,近2倍的蛋白有26KD、36KD和40KD,同时,54KD和108KD的蛋白则在高盐胁迫时被显著抑制。
4.采用FDA-PI双染色的方法,应用流式细胞仪检测A57在盐度胁迫下的细胞活力、形态学变化,分析结果表明,高渗胁迫初期,细胞内容物含量迅速下降,体积增大,膜损伤细胞比例在6h内迅速升高,至24h保持稳定。
【关键词】：盐藻 盐度 温度 光照 RAPD ITS 流式细胞术
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