杜氏盐藻RbcS基因cDNA片段的克隆和序列分析

目的:克隆杜氏盐藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基RbcScDNA片段。方法:根据莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基RbcS氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计一对简并引物,采用RTPCR方法及该简并引物克隆杜氏盐藻RbcScDNA。

PCR产物经TA克隆与Tvector相连,转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定,对阳性克隆进行测序分析。将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性比较。结果:得到的cDNA长度为209bp,编码69个氨基酸。