杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白cDNA片段的克隆及序列分析

核基质附着区(matrixattachmentregion,MAR)DNA是基因组中一种很重要的基因间边界序列,序列特异性MAR结合蛋白可以特异性地与MAR序列结合,从而在细胞内对基因表达起调控作用[1]。因此分离纯化MAR结合蛋白因子对于揭开MAR序列在基因表达调控中的机制具有极其重要的意义。

目的:克隆杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白片段。方法:根据多种生物MAR结合蛋白氨基酸的高度保守序列EWYGWHF和KYGLIYQ,设计一对简并引物,以杜氏盐藻的cDNA为模板,进行PCR扩增,PCR产物与T载体相连,转化大肠杆菌JM109后,筛选鉴定,对阳性菌落进行测序分析。将测序结果推导成氨基酸序列,与GenBank上其他物种MAR结合蛋白序列进行同源性分析。结果:在杜氏盐藻中得到的cDNA片段,核苷酸长度为474bp,编码158个氨基酸(GenBank收录号为DQ124215)。推导的氨基酸序列与稻、莲、拟南芥、豌豆、烟草、酵母、果蝇和蟾的MAR结合蛋白相比较,同源性分别为74%、73%、73%、73%、71%、70%、68%和67%。结论:所克隆的序列可能为杜氏盐藻MAR结合蛋白片段。

中国盐藻网【作者单位】：郑州大学细胞生物学研究室

【关键词】：杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白cDNA简并引物

【基金】：国家自然科学基金资助项目30270031,30470030教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20050459007