改进简并PCR法克隆盐生杜氏藻烯醇酶基因

该实验针对基因同源性克隆中存在的问题,采用改进简并PCR法对盐生杜氏藻具抗逆功能的烯醇酶基因。改进后的同源引物简并度从1000倍以上降低至100倍以下,利用RTPCR成功地扩增出一条630bp的盐藻cDNA片段,该片段与其他物种的烯醇酶基因具有很高的相似性。

在此基础上进行5’和3’RACE获得了盐藻烯醇酶基因的全长cDNA,其长度为1734bp。序列分析表明,该基因与莱茵衣藻烯醇酶基因的相同性达83%,相似性达89%,且在进化上与莱茵衣藻的亲缘关系最近。

【关键词】： 盐藻 烯醇酶 基因克隆 简并PCR RACE

【基金】：国家转基因植物与产业化专项基金(J0 0 A 0 0 8 0 9)“863”国家项目( 2 0 0 1AA2 12 161)资助