盐藻钠/磷共转运通道基因及甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的分离及功能分析

盐藻钠/磷共转运通道基因及甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的分离及功能分析

利用通过抑制差减杂交(SSH)方法得到的两个明显受高盐胁迫诱导的差异片段A60及CP1F1为探针,我们从盐藻的cDNA文库中分离得到两个钠/磷共转运通道基因全长cDNA(DsSPT1和DsSPT2),它们分别编码一个由672个氨基酸组成的蛋白DsSPT1和一个由675个氨基酸组成的蛋白DsSPT2。

蛋白序列同源性分析表明,DsSPT1和DsSPT2与周氏扁藻高亲合性无机磷转运通道TcPHO的同源性分别为31.2%和29.6%。二级结构跨膜预测表明,DsSPT1和DsSPT2均为具有11个跨膜区的膜蛋白。

Northern进一步分析表明:DsSPT1和DsSPT2的均受盐胁迫和磷饥饿诱导而转录表达增强。利用SSH片段A60cDNA片段为探针,从盐藻的基因组文库中分离到盐藻钠磷共转运通道基因GDsSPT1,并发现在GDsSPT1基因的启动子区域(-711～-715bp)存在一个响应环境胁迫的顺式元件(CACGT)。

Southern分析表明:在盐藻基因组中至少存在2个以上的无机磷转运通道基因。酵母功能表达结果显示:DsSPT1和DsSPT2这两个基因均使盐敏感突变体G19变得更敏感。

上述结果表明,我们从盐藻中首次分离得到了两个受NaCl和无机磷差异调控的无机磷转运通道基因cDNA。

【关键词】：盐藻钠/磷共转运通道基因Northern启动子酵母盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因Northern进化地位原核表达

【学位授予单位】：中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）

【学位级别】：博士

【学位授予年份】：2006

【分类号】：Q943.2