毛白杨无性系耐盐性比较与转耐盐基因的研究

本研究以八个毛白杨优良无性系植株为试验材料。在盐胁迫条件下，调查了八个毛白杨优良无性系的存活状况，受害症状及苗高等生长性状，同时测定了植株叶片内叶绿素，脯氨酸，MDA的含量等理化指标。进而，利用农杆菌介导的基因工程方法将mtlD基因导入毛白杨中，获得了转基因植株。

经研究获得如下主要结论： 1．经盐胁迫处理后，毛白杨各个无性系的耐盐能力存在差异，主要表现在苗木存活状况，受害特征出现的时间和受害程度，以及高生长量等方面。

2．经盐胁迫处理后，随着盐浓度的升高，毛白杨无性系植株的叶片内叶绿素含量逐渐降低，MDA含量逐渐升高，脯氨酸含量先上升后下降。

3．根据盐胁迫后毛白杨优良无性系植株的生长表现，再辅以生理生化指标，评定八个毛白杨优良无性系的耐盐性，由强到弱可分为三个类型：L5和L16耐盐能力较强；L11、L14和L27耐盐能力中等；L12、L13和L24对盐胁迫敏感。

4．建立了毛白杨优良无性系的最佳再生体系：最佳增殖培养基是MS+6—BA0.3mg／L+NAA0.1mg／L附加糖3.0％和琼脂0.5％；最佳叶片分化培养基是MS+6—BA3.0mg／L+NAA0.1mg／L附加糖3.0％和琼脂0.5％；最佳生根培养基是1／2MS基本培养基附加NAA0.3mg／L，另加入糖2.0％和琼脂0.5％。

5．同龄同代的无根组培苗叶片和生根组培苗叶片作外植体，不定芽生成率有差异；不同类型培养基(WPM、MS)对毛白杨叶片再生率的影响无显著差异；在培养基中加入不同浓度梯度的AgNO_3溶液，结果发现4mg／L的AgNO_3能够提高叶片产生不定芽的数量。

6．按照以下优化的转化体系：菌液OD_(600)=0.3-0.5；侵染时间为10—20min；叶片在黑暗下共培养2-3天；卡那霉素的临界浓度是50mg／L，对筛选出的抗性植株进行PCR及PCR-Southern检测。结果表明，成功获得了转入mtlD基因的毛白杨植株。

【关键词】：毛白杨 无性系 耐盐性 mtlD基因 农杆菌介导法 遗传转化