外源报告基因EGFP在盐藻中实现瞬时表达

盐藻是耐高盐的单细胞真核微藻,正常条件下绿色细胞中蛋白质的含量占细胞干重的 50%～60%,氨基酸组成与植物蛋白相近,在高盐胁迫等诱导条件下,β胡萝卜素含量可 高达细胞干重的14%[1,2]。β胡萝卜素不仅是维生素A原,还能够吞噬自由基,具有抗衰老、降低心血管发病的概率。

探索杜氏盐藻(Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法。利用烟草花叶病毒启动 子(CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP,转化盐藻。

EGFP在CaMV35S启动下表达出绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下看到发绿色荧光的转基因盐藻。根据荧光数目进行统计,转化效率高于5%。衣藻来源的启动子atpA在盐藻中未 能启动EGFP的表达。用直径1μm的金粉颗粒和06μm的金粉进行基因枪法转化,1μm的 金粉颗粒成功将外源基因导入盐藻,用06μm的金粉配合多种技术参数也没有将外源基 因导入盐藻。

EGFP可以用作盐藻遗传转化的报告基因使单细胞真核生物盐藻可以利用流式细胞术 (FACS)等技术进行筛选,从而避开平板筛选转基因盐藻的限制,并使转基因盐藻实现无 抗生素筛选成为可能。

【作者单位】： 北京大学生命科学学院

【关键词】： 微藻 杜氏盐藻 遗传转化 CaMVS 加强型绿色荧光蛋白报告基因

【基金】：国家九五攻关项目 (No .96 C0 2 0 4 0 5 )

【分类号】：Q943.2