杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列驱动bar基因的表达

杜氏盐藻(Dunaliellasalina)是一种单细胞真核绿藻,无细胞壁,抗逆性极强,是迄今所发现的最耐盐的生物之一,可在0.05~5mol/L的盐水中生长。杜氏盐藻作为宿主表达外源基因,具有繁殖速度快、培养简单、表达产物下游纯化过程简单等优越性。

目的:探讨杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列(Pnr)是否可以驱动外源基因在杜氏盐藻中的表达。

方法:利用改进的重叠区扩增基因拼接法(SOEing),将杜氏盐藻NR基因5′上游序列(Pnr)与除草剂抗性基因bar融合。

同时将NR基因3′端序列(Tnr)与克隆载体pEGM-7zf连接,构成中间载体pEGM-7zf-Tnr。

最后将融合片段Pnr-Tnr与中间载体连接,构建含Pnr-bar-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NBT。电击法转化杜氏盐藻,通过草丁膦培养筛选转化藻株后对其进行分析。

结果:转化藻株总RNA的RT-PCR结果扩增出与bar基因序列完全一致的目的片段。

结论:杜氏盐藻NR基因Pnr能够驱动外源基因bar的转录。